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探討經紋球藻萃取物對口腔癌細胞株抑制作用的機制

為了解決fwb sp分別的問題，作者黃政諺 這樣論述：

口腔癌為全球前十大癌症之一，名列台灣男性常見癌症的第四位。口腔癌中有超過90％的患者被確定為所謂的口腔鱗狀細胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma；OSCC)，主要造成的原因為長期嚼食檳榔、抽菸、飲酒，或是人類乳突病毒的感染。多數患者就診時已進入第三或四期，此時的癌細胞已經逐漸轉移至其他部位，造成五年存活率低下，所以新藥物的開發及探討誘導癌病變之檳榔成分益顯重要。而微藻已被發現具抗發炎及抗癌活性，成為新藥物開發的新目標。本研究所使用的材料為微藻中經紋球藻屬(Coelastrella)之經紋球藻C. F50，是於台灣南部新鑑定出的品種，其有機萃取物，以不同濃度分別處理

OC2和OCSL二株國內建立的口腔癌細胞株，並於處理後不同的時間點透過MTT試驗來測試細胞生長情況，結果發現C. F50萃取物能降低二株細胞株的生存率，其IC50皆約為500 μg/ml。在細胞侵入試驗(Cell invasion assay)中也發現C. F50萃取物處理後確實可以抑制OC2和OCSL的侵入能力。另外，也測試臨床上用來治療口腔癌常見的第一線的化療藥物Cisplatin和C. F50萃取物一同處理之效果，結果顯示兩者一同添加處理比個別單一藥物處理更能夠抑制癌細胞株生長。此外，為進一步探討此抑制作用的機制，以實驗室先前發現活性氧化物質(Reactive Oxygen Specie

s, ROS)和內質網壓力(ER stress)啟動未摺疊蛋白反應(Unfolded Protein Respond, UPR)所造成的一系列訊息傳遞途徑為主要目標，因為C. F50萃取物處理OC2和OCSL後其UPR相關的p-PERK、IRE1α、GRP78等標記蛋白之量皆有下降的現象，但ROS卻有上升的情況，所以推測C. F50萃取物可能使ROS堆積過量，而抑制UPR的作用，進而造成細胞壞死。我的初步實驗結果也顯示:與細胞增殖、生長和遷移相關的蛋白p-Akt (Akt)和p-mTOR (mTOR) 在以C. F50萃取物處理時均有被下調的情形。另外，因先前有文獻指出mTOR本身會抑制細胞自

噬的發生，所以我也透過LC3的表現來評估C. F50是否會造成細胞自噬，發現C. F50處理後的LC3的量並無明顯變化，以Acridine orange染色結果亦是如此，故推測細胞自噬並非C. F50造成細胞死亡的主因。 另外，本實驗室先前的研究中發現檳榔水萃取物中有誘發細胞核固縮壞死(pyknotic necrosis)的能力，其核固縮壞死發生時會先造成細胞的腫脹，這樣的現象跟臨床上有檳榔嚼食患者的病理組織切片觀察相當類似，故我們想要更進一步的去分析檳榔水萃取物中主要造成這種現象的成分為何。以HPLC (高效液相層析儀)從檳榔水萃取物中初步分離出幾個波峯，分別處理細胞並觀察是否造成細胞

核固縮，目前有發現數個波峯段之成分是具有效果的，未來希望找出造成細胞核固縮的有效成分。

以木黴菌發酵麩皮及米糠生產富含機能性代謝物之益生飼料

為了解決fwb sp分別的問題，作者朱益霆 這樣論述：

近來世界人口快速成長，未來勢必面臨能源缺口，發展生質能源是解決能源問題的方案之一。可食性穀物為第一代生質能源的原料，造成飼料原料價格波動。大量且便宜的副產物像是麩皮、米糠可作為替代性原料，但其含較多的非澱粉性多醣會阻礙營養物質的消化。本試驗以較高代謝能的米糠配合麩皮應用於肉雞飼糧提升代謝能。木黴菌為出色的纖維降解酵素生產者，固態發酵具低耗能及低設備成本的優點，因此可利用木黴菌固態發酵改善副產物的利用。過去研究發現受到產氣莢膜梭菌攻毒肉雞，添加多醣降解酵素於高非澱粉性多醣飼糧能減輕生長性狀及腸道健康的負面影響。然而，非攻毒模式下探討含多糖降解酵素的發酵副產物對腸道健康影響的研究並不多。試驗目的

以木黴菌發酵麩皮及米糠，提升其營養價值，利用副產物降低飼糧成本，評估其對於肉雞的生長性狀、腸道性狀、緊密連結蛋白基因表現的影響，最後評估成本效益。試驗分為三個部分，第一部分為篩選適合生產纖維降解酵素的基質。麩皮、大豆殼、米糠及玉米酒糟接種孢子懸浮液(107孢子/毫升)進行固態發酵，以木聚醣酶及甘露聚醣酶活性為指標，麩皮具有最佳酵素活性並為最佳基質。第二部分建立固態發酵之最佳條件。以木聚醣酶活性為指標，評估發酵水分及天數條件，發酵麩皮及米糠的最佳條件分別為60%水分、六天以及60%水分、八天。發酵麩皮及米糠的總酚和還原醣含量均有增加且發酵麩皮有較佳的螯合亞鐵離子能力及總抗氧化能力。麩皮及米糠經發

酵後，顯著增加粗蛋白含量並且降低半纖維素含量。量化發酵麩皮及米糠中，發現少量的木三糖和木六糖。最後評估發酵物作為肉雞替代性原料之應用性，將378隻一日齡白肉雞(Ross 308)逢機分配至三個處理組，分別為基礎飼糧組、5%麩皮加5%米糠取代組以及5%發酵麩皮加5%發酵米糠取代組，試驗35天。全期而言，處理組間生長性狀無顯著差異。處理組間十二指腸及空腸相對重量均無顯著差異且空腸及迴腸的腸道型態均無顯著差異。腸道菌相結果顯示，不管迴腸或是盲腸，處理組間乳酸菌、產氣莢膜梭菌菌數均無顯著差異。在腸道緊密連結蛋白基因表現方面，處理組對於各基因表現量均無顯著影響。成本效益結果顯示5%發酵麩皮加5%發酵米糠

取代組淨收益較基礎飼糧組來得少。綜合以上所述，木黴菌固態發酵麩皮及米糠能降解副產物的纖維成分以及提升其營養價值，以發酵物餵飼肉雞並無造成生長性狀、腸道性狀以及與腸道屏障相關基因表現負面影響。未來傳統原料價格持續上漲，發酵麩皮及米糠作為替代性原料具應用潛力。